牛体外受精胚胎在成份确定培养液内的发育

将牛体外受精胚胎培养于化学成份确定的 SOF+PVA的培养系统内 ,观察了不同PVA浓度对胚胎体外发育的影响 .结果在 1 mg/ml、3mg/ml和 5mg/ml的 PVA浓度条件下 ,囊胚的发育率分别为 2 7.5% a、1 9.1 % a和 4 .3% b( a>b,P<0 .0 1 ) .将体外受精胚胎分别培养于 M1 99+输卵管上皮细胞、SOF+BSA和 SOF+PVA的三种培养系统内 ,囊胚的发育率分别为 2 0 .4 %、2 9.0 %和 2 7.5% ,结果表明本研究确立的化学成份确定的体外培养系统可以用于牛体外受精胚胎的发育培养 .     

Sexual difference in gonadal development of embryonic chickens after treatment of polychlorinated biphenyls

Polychlorinated biphenyls (PCBs) are ubiquitous, persistent and lipophilic environmental endocrine disrupters that can be biomagnified in human and animals including birds and thus to affect reproductive functions. Poultry meat and eggs contain a great deal of fat and possibly concentrate higher PCBs and other environmental contaminants such as dichlorodiphenyl-trichloroethane (DDT). In order to identify the adverse effects of PCBs and possible sexual difference on chicken gonadal development, Aroclor 1254 was injected into fertilized Hyline chicken eggs before incubation. Four groups of eggs received yolk injection of either peanut oil as control, 1, 10 or 100 mg/egg of Aroclor 1254 as treatment group, respectively. After hatching the gonads were removed for histological examination. Testicular structure was apparently changed and exhibited dramatic decrease in area of the transverse sections (1 mg/egg, P＜0.01; 10 and 100 mg/egg, P＜0.001), diameter (10 and 100 mg/egg, P＜0.05) and relative area of the testicular tubules (10 mg/egg, P＜0.05; 100 mg/egg, P＜0.01). Most testicular tubules of the highest dose group degenerated and even disappeared. The differentiation of germ cells was retarded in all groups treated with Aroclor 1254. Some germ cells were irregular in shape, with vacuolated cytoplasm and hyperchromatism nucleus (pyknosis) in 1 and 10 mg/egg groups and almost all germ cells in 100 mg/egg group. In contrast, the area of the left ovarian transverse sections increased dramatically (10 and 100 mg/egg,P＜0.001), the ovarian cortex manifested a significant increment in thickness (1, 10 and 100 mg/egg, P＜0.001) and a higher number of oocytes was observed (1, 10 and 100 mg/egg, P＜0.001) in the female chickens treated with Aroclor 1254 compared with the control group. A few oocytes with vacuolated cytoplasm and hyperchromatic nucleus were also observed in ovarian cortex after PCBs exposure. These results showed that PCBs interfered with gonadal development with a sex-specific pattern and retarded differentiation of spermatogonia into spermatocytes but accelerated differentiation of oogonia into oocytes in the embryonic chickens.     

文昌鱼早期发育中两种碱性磷酸酶的表达

以BCIP为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中的表达图式.在囊胚、原肠胚和神经胚早期(12～13小时)未检测到碱性磷酸酶的特异性表达;到神经胚中期(15小时,约6个体节),碱性磷酸酶在每一体节的中部开始表达,在胚胎中形成3～6个条纹;在18小时神经胚中,碱性磷酸酶在肌节中表达;到24小时在后部内胚层中也开始表达;在36～48小时幼体中,碱性磷酸酶在消化道中强烈表达,但在咽鳃区不表达,同时在肌节中仍有弱的表达.研究表明碱性磷酸酶可能在肌节的发育过程中具有一定作用.碱性磷酸酶在消化道中的表达可能与这一时期消化道开始行使功能有关.为了鉴定文昌鱼碱性磷酸酶的性质,还研究了L-苯丙氨酸对碱性磷酸酶表达图式的影响,结果表明文昌鱼至少存在两种碱性磷酸酶在消化道中表达的一种是肠型的,与脊椎动物碱性磷酸酶可能为同一类型;另一种主要在肌节中表达,可能是组织非特异性的碱性磷酸酶.     

斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、序列分析及组织表达

 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一,在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,成功获得了斑马鱼3种胰蛋白酶原cDNA序列(zftry1a、zftry1b和zftry2)。结果表明,zftry1a和zftry1b均有242个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。zftry2由247个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和9个氨基酸(APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。进化树结果显示,斑马鱼zftry1a和zftry1b属于group I,为阴离子胰蛋白酶原;斑马鱼zftry2属于group II,为阳离子型胰蛋白酶原。RT-PCR结果显示,三者组织分布模式类似,且在肠中有最高表达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。     

萘醌化合物对斑马鱼肝脏染色体损伤研究

 为进一步研究萘醌化合物对斑马鱼致毒机理,选取甲萘醌、阿托伐醌、布帕伐醌、2-羟基-1,4-萘醌和2-乙酰氧基-1,4-萘醌为研究对象,利用微核试验方法研究了这5种萘醌化合物对斑马鱼肝脏96 h内染色体的损伤情况.研究结果表明,这5种萘醌化合物对斑马鱼肝脏染色体均有不同程度的微核效应.其中以甲萘醌最为明显,2-乙酰氧基-1,4-萘醌微核效应最弱;且这5种萘醌化合物微核效应均呈现时间-效应与剂量-效应关系.说明萘醌化合物可在不同程度上引起斑马鱼染色体的损伤,具有一定的遗传毒性.     

运用热带爪蟾胚胎检测黑臭河道底泥的生态毒性

2010年9月~12月,在温州山下河（S）和九山外河（J）先后采集底泥样品5次.将热带爪蟾胚胎（NF10—NF11）暴露于1〖DK〗∶4底泥提取液（第1—4次）和间隙水（第5次）中48 h,观测其发育状况.结果表明,山下河S1样点连续5次的底泥样品均导致胚胎全部死亡,表现出很强的毒性.暴露于山下河底泥提取液的胚胎体长均显著短于空白对照组,而暴露于九山外河底泥提取液的胚胎体长仅第3次显著短于空白对照组.暴露于山下河底泥提取液的胚胎畸形率均高于暴露于九山外河底泥提取液的,尤其在第4次检测中,暴露于S2-S4底泥提取液的胚胎畸形率均高达100%,而九山外河最高仅为70%（J2）和40%（J1）.热带爪蟾胚胎直接暴露于所有采样点的山下河底泥间隙水均全部死亡.由此可见,山下河的整体毒性高于九山外河,底泥间隙水毒性高于底泥提取液.本研究表明,温州市典型的黑臭河道底泥对爪蟾胚胎的发育均有不同程度的影响,具有明显的生态毒性.同时,运用爪蟾胚胎可以有效地检测底泥的毒性效应,而且对不同河流和采样点的毒性评价具有较好的区分度.     

七叶树种子离体胚的超低温保存

通过对七叶树种子离体胚超低温(-196 ℃)保存后生活力、相对电导率和脱氢酶活性的测定分析,初 步研究其长期保存的可行性。结果表明：含水率是影响七叶树种子离体胚超低温保存的重要因素,超低温 保存时应对种子进行适度脱水。超低温保存后,七叶树离体胚生活力最高为93 %,其处理组合中57.3 %含 水率+缓速冷冻+快速解冻+10 %二甲基亚砜+10 %蔗糖+20 %聚乙二醇为最佳处理方案。     

腰带长体茧蜂卵和早期胚胎体外发育的初步研究

 通过在体外条件下培养腰带长体茧蜂侧输卵管处解剖得到的脱去滤泡细胞的成熟卵及从寄生早期幼虫血淋巴中获得的初期胚胎,对腰带长体茧蜂卵和胚胎的初期发育进行了初步的研究。结果表明,以TC-100为基础培养基加入一定量寄主幼虫血浆和胎牛血清时,从侧输卵管处解剖得到的卵在合适的体外培养条件下可以进行卵裂,且卵裂产生的初级胚胎可以被释放到培养基中。初级胚胎可以在胚外膜内进行分裂生成二级胚胎细胞,但二级胚胎不能被释放出胚外膜。从寄生初期寄主幼虫体内得到的初级胚胎可以在体外培养条件下长大并持续通过胚外膜凹陷进行增殖,但无法进入个体发育阶段,胚胎最后黑化死亡。     

斑马鱼Cyclin C的cDNA克隆及其在发育过程中的表达

细胞周期蛋白C(cyclin C)与细胞周期依赖性蛋白激酶cdk8结合,通过磷酸化RNA 聚合酶 II 和 TFIIH调控转录.在脊椎动物胚胎发育过程中有关细胞周期蛋白C合子型转录激活机制尚知甚少.本研究克隆了斑马鱼细胞周期蛋白C基因,并用Northern杂交和整体原位杂交技术检测其在胚胎发育过程中的表达状态.结果显示,斑马鱼细胞周期蛋白C高度保守,与人细胞周期蛋白C有88％的蛋白序列同源;斑马鱼细胞周期蛋白C在母型期开始表达,其表达伴随中囊胚转换时期的合子型转录激活以及整个胚胎发育过程.